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本制品是专用于染料法(SYBR Green I)实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含Fast hotstart Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I荧光染料、Mg 2+和校正染料ROX，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后的cDNA靶序列检测。本品所含荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA相结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的Fast hotstart TaqDNA Polymerase，能有效减少在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，而酶的激活仅需在95℃下孵育3min。整个PCR反应过程比普通反应可节省约40分钟，大大缩短了PCR的反应时间。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异产物的产生，显著提高了PCR的扩增效率。该产品应用范围广，适用于普通和快速定量PCR程序。所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，适用于以Low ROX作为校正染料的荧光定量PCR仪。

• 使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。
  
• 本制品中含有荧光染料SYBR Green I和ROX，保存本制品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
  
• 本制品中ROX含量较低，适用于ABI7500、Stratagene Mx3000、3005、4000等仪器。
  
• 避免反复冻熔本品，反复冻熔可能使产品性能下降。本制品长期保存可置于-20℃，避光。如果在短期内需要频繁使用，可在2～8℃保存。
  
• 本品不能用于探针法荧光定量PCR。

• PCR反应体系
  

  成分	用量	终浓度
  2×BalbExcel FastSYBR PCR Mix(含ROX)	25μL	1×
  Forward Primer,10μM	1μL	0.2μM
  Reverse Primer,10μM	1μL	0.2μM
  Template DNA	2μL	-
  RNase-Free ddH2O	至50μL	-

  • 通常引物浓度以0.2μM可以得到较好结果，可以终浓度0.1～1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
    
  • 通常DNA模板的量以10～100ng基因组DNA或1～10ng cDNA为参照，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
• PCR反应程序
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	95℃	3min	1
  变性	95℃	5s	35～40
  退火/延伸	60℃	20s
  熔解曲线分析	95℃	15s	-
  	60℃	1min
  	95℃	15s
  	60℃	15s

  • 本制品所采用的酶须在预变性95℃、3min条件下实现酶的活化。
    
  • 建议采用两步法PCR反应程序，若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试进行三步法PCR扩增，退火温度请以56℃～64℃的范围作为设定参考。
    
  • 熔解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定，本说明是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定。